Park和Sanders研制了一種分離受損彎曲桿菌的選擇性培養(yǎng)基。ISO 10272: 1995標(biāo)準(zhǔn)推薦使用這種培養(yǎng)基分離彎曲桿菌。因?yàn)镮SO現(xiàn)行方法(1997年版)和英國(guó)標(biāo)準(zhǔn)1996修定版所介紹的抗生素混合物的制備方法都不太恰當(dāng),目前暫時(shí)仍使用Exeter 培養(yǎng)基分離彎曲桿菌,按照Roberts等人(1995)的操作步驟進(jìn)行操作。Cony等(1995) 對(duì)各種不同的增菌、分離培養(yǎng)基的合理性和優(yōu)點(diǎn)進(jìn)行了詳盡的比較。
由于這類(lèi)培養(yǎng)基成分復(fù)雜,制備吋很微小的偏差都會(huì)對(duì)培養(yǎng)基的性能造成很大的影響,因此,最好使用商品化的脫水培養(yǎng)基和制備好的抗生素補(bǔ)充液。
平板置于含5%?10%氧氣、10%二氧化碳和85%?90%氮?dú)獾奈⑿柩醐h(huán)境中培養(yǎng)。 將厭氧罐(不加催化劑的)部分排空,再注人氮?dú)?二氧化碳混合氣體至大氣壓,就能很容易地得到這種混合的培養(yǎng)環(huán)境。也可用能安裝在厭氧罐(不含催化劑)上的空氣吸收/發(fā)生袋(如牛津彎曲桿菌袋)或空氣發(fā)生袋(對(duì)于不含催化劑的罐)獲得培養(yǎng)環(huán)境(例如牛津彎曲桿菌產(chǎn)氣試劑盒-BR56與3.4L含催化劑的厭氧罐結(jié)合使用,或BR60與2.5L含催化劑的厭氧罐結(jié)合使用)。
檢測(cè)步驟
1、從生禽肉等樣品中直接分離
擦拭小雞的皮膚(尤其是肛門(mén)附近的部位)或腹腔,用拭子在Preston血瓊脂平板、 Exeter瓊脂平板或Preston無(wú)血頭孢哌酮瓊脂平板的表面劃線(xiàn)接種。置于微需氧環(huán)境中培養(yǎng)血瓊脂或Exeter瓊脂37C培養(yǎng)4h,在42C下培養(yǎng)44?68h; Preston 無(wú)血頭孢哌酮瓊脂37T:培養(yǎng)48hc。
2、冷凍食品增菌
(1) 將25g食品混人225mLExeter液體培養(yǎng)基中,用均質(zhì)器混勻。轉(zhuǎn)人到帶螺帽的容器中(罐或瓶),容器頂部的開(kāi)口要小(有利于保持微需氧環(huán)境),擰緊螺帽,在37:培養(yǎng) 18-48h
(2) 轉(zhuǎn)接選擇性瓊脂培養(yǎng)基(如Preston無(wú)血頭孢哌酮瓊脂,Exeter瓊脂或Preston血瓊脂)。
3、驗(yàn)證
用鏡檢觀(guān)察法進(jìn)行彎曲桿菌的驗(yàn)證(運(yùn)動(dòng)、革蘭氏陰性、無(wú)孢子、彎曲的s-型的桿狀菌)。另外,彎曲桿菌的過(guò)氧化氫酶和氣化酶試驗(yàn)為陽(yáng)性。