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人乳腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞株

細(xì)胞培養(yǎng)說(shuō)明書(shū)

細(xì)胞名稱:Mcf-7/ADR;人乳腺癌阿霉素耐藥細(xì)胞株

生長(zhǎng)特性:貼壁

培養(yǎng)條件:RPMI-1640+10%FBS+1%P/S+500ng/mlADR

培養(yǎng)環(huán)境:37 5% CO2,,95% AIR

傳代比例:1:2傳代,2~3天換液

凍存條件:90%FBS+10%DMSO

QC檢測(cè):支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

 1、細(xì)胞傳代:

1)細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí),棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次;

2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入5ml完全培養(yǎng)液終止消化,再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3)棄上清,沉淀細(xì)胞用1-2ml完全培養(yǎng)基重懸,然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代,最后放入37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

 2、細(xì)胞凍存:

1)細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí),棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細(xì)胞一次;

2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化,輕輕吹打細(xì)胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心5min;

3)用適量的凍存液(FBSDMSO=9 1)重懸細(xì)胞,并放置于凍存管中;

4)先將細(xì)胞凍存管放置于-20 1.5h,然后將其移入-80℃過(guò)夜,24h后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。

3、細(xì)胞復(fù)蘇: 1)從液氮中取出細(xì)胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具),快速將其置入37℃水浴中解凍,直至凍存管中無(wú)結(jié)晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁; 2)將凍存管中的細(xì)胞移至含6ml完全培養(yǎng)基的15ml離心管中, 1000rpm離心5min;

 3)棄上清,沉淀用6ml完全培養(yǎng)基重懸,接種25cm2培養(yǎng)瓶,于37℃,5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

 

 

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