| 產品名稱 |
Psi2 DAP |
| 商品貨號 |
MZ-0404 |
| 中文名稱 |
小鼠胚胎成纖維細胞 |
| 形態(tài)特征 |
成纖維細胞 |
| 生長特性 |
貼壁生長 |
| 特征特性 |
這這株細胞生成一種可以感染小鼠細胞的載體。Psi2DAP細胞生成的載體編碼了人類胎盤堿性磷酸酯酶基因和新霉素抗性基因。這株細胞通過Psi2細胞插入一個重組的逆轉錄病毒(DAP)基因組衍生而來。被這種Psi2DAP產生的載體感染的細胞表達的磷酸酯酶可用組織化學方法檢測，可以用作體內追蹤他們命運的標記。這些細胞也可能產生輔助病毒。檢測輔助病毒的方法或其他逆轉錄病毒技術，請參考Cepko,C.L.Lineageanalysisandimmortalizationofneuralcellsviaretroviru |
| 細胞污染 |
HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌檢測陰性。 |
| 培養(yǎng)條件 |
DMEM-H: Dulbecco＇s Modified Eagle＇s Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose) 優(yōu)質胎牛血清，10% |
| 傳代方法 |
消化3-5分鐘。1:2。3天內可長滿。 |
| 細胞凍存步驟 |
待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。下面T25瓶為例； 1．細胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，細胞變圓脫落后，加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數板計數。 2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數量分配到凍存管中，注意凍存管做好標識。明舟生物按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
| 復蘇細胞步驟 |
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。 |
| 細胞傳代步驟 |
如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。 |
| 凍存條件 |
基礎培養(yǎng)基+8%DMSO+20%FBS |
