產(chǎn)品名稱 |
NCI-H446 [H446] |
商品貨號(hào) |
MZ-0241 |
中文名稱 |
人小細(xì)胞肺癌細(xì)胞 |
細(xì)胞數(shù)量 |
1*10^6 |
組織來(lái)源 |
小細(xì)胞肺癌;胸腔積液轉(zhuǎn)移;男性 |
細(xì)胞種屬 |
Homo sapiens, human |
細(xì)胞污染 |
HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)陰性。 |
生長(zhǎng)特性 |
mixed, adherent and suspension |
培養(yǎng)基 |
RPMI-1640+10% FBS+1% P/S |
形態(tài)特征 |
epithelial |
傳代方法 |
1:3-1:6 |
培養(yǎng)條件 |
Atmosphere: Air, 95%; CO2, 5%。Temperature: 37℃ |
細(xì)胞描述 |
NCI-H446細(xì)胞株從一位小細(xì)胞肺癌患者的胸水中建立。細(xì)胞的原始形態(tài)并不具有小細(xì)胞肺癌特征。這個(gè)細(xì)胞株是小細(xì)胞肺癌的生化和形態(tài)學(xué)上的變種,表達(dá)神經(jīng)元特有的烯醇酶和腦部肌酸激酶同功酶。左旋多巴脫羧酶、蠶素、抗利尿激素、催產(chǎn)素或胃泌激素釋放肽未達(dá)到可檢測(cè)水平。C-mycDNA序列擴(kuò)增約20倍,c-mycRNA比正常細(xì)胞增加15倍。最初傳代培養(yǎng)基用添加10nM氫化可的松,0.005mg/ml胰島素,0.01mg/ml鐵傳遞蛋白,10nM17-beta-雌二醇,30nM亞硒酸鈉的RPMI1640,95%。胎牛血 |
細(xì)胞傳代步驟 |
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。4. 將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中 |
復(fù)蘇細(xì)胞步驟 |
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過(guò)夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。 |
細(xì)胞凍存步驟 |
:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例;1.細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入2ml完全培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 |
細(xì)胞凍存 |
Freeze medium: 50% basal medium+40% FBS+10%.DMSOStorage temperature: liquid nitrogen vapor phase |
細(xì)胞運(yùn)輸 |
干冰運(yùn)輸(2ml凍存管)或活細(xì)胞運(yùn)輸(T25細(xì)胞瓶) |